傳說用耶穌在最後的奪寶奇兵晚餐中用到的聖杯喝水，便能長生不老。奪寶奇兵在一次掘金活動中，奪寶奇兵記載聖杯的奪寶奇兵碑石被發現，聖杯存在的奪寶奇兵可能吸引著大批的瘋狂的人展開尋找。印第安納瓊斯博士（Harrison Ford飾）也是奪寶奇兵他們中的一員，甚至連他的奪寶奇兵父親老瓊斯（Sean Connery飾）也陷入其中——但他給瓊斯留下聖杯的筆記後便不知所蹤。　　踏上威尼斯的奪寶奇兵土地，瓊斯和事先約好的奪寶奇兵史奈達博士（Alison Doody飾）會面，他們在圖書館裡憑線索找到聖盾後，奪寶奇兵卻開始遭到莫名的奪寶奇兵來自十字劍兄弟的追殺。　　一番波折後，奪寶奇兵瓊斯終於找到瞭老瓊斯，奪寶奇兵同時，奪寶奇兵史奈達的奪寶奇兵納粹身份暴露，筆記被搶走。聖杯隨時都有可能落入納粹的手中。　　於是，瓊斯父子倆開始聯袂上演拯救聖杯的精彩大戲！